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C肽放射免疫實驗代測

通用名：碘[ 125I]人 C 肽放射免疫-分析藥盒

漢語拼音：Dian [ 125I] Ren C-tai Fangshemianyifenxi Yaohe

英文名：Iodine [ 125I] Human C–peptide Radioimmunoassay Kit

簡稱：碘[ 125I]- C-P 放免藥盒 [使用目的] 用于科研血清樣本中 C 肽(C-P)的定量測定

[用途] 1) 指導胰島素治療，對于胰島素治療的樣本，C 肽測定可以確定是否繼續(xù)使用胰島素治 療，還是用口服降糖藥或飲食治療。C 肽的測定值對糖尿病的治療具有重要意義。 2) 對低血糖綜合癥的診斷。 3) 對胰島移植和胰腺移植的樣本，C 肽測定可以了解移植是否存活和 B 細胞的功能。 4) 同時測定 C 肽和胰島素可了解肝病的變化，如肝硬化時，外周血 C 肽/胰島素的比值下 降。 5) 對胰島或胰腺腫瘤-治療后復發(fā)和功能的診斷。

[試驗原理] 本藥盒采用競爭放射免疫分析法，通過二抗沉淀抗原-抗體免疫復合物來測定血清中 C 肽的含量，待測血清、標準品中的 C 肽和 125I-C–P 與有*的抗體競爭結合。125I-C–P 一 部分與抗體結合為復合物，另一部分游離。加入分離試劑，離心使復合物部分沉淀，與游離 部分分離，棄去上清液，測定沉淀物的放射性計數。待測血清和標準中的 C 肽含量與與復合 物的放射性強度呈負相關，用一系列不同濃度的 C 肽作標準，可獲得標準曲線，從標準曲線 上可查出血清中 C 肽的含量。

[儀器] 1、 γ－計數器 2、 低溫離心機 3、 恒溫水浴箱 [樣本要求] 110 微升科研血清樣本。 采靜脈血 5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉／分離心，取其上清液，放置玻 璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲存 6 個月。 嚴重溶血、高濃度的脂類、膽-紅素對測定結果有影響。

[注意事項] 1) 收到分析試劑盒后，盡快存放在 2 – 8℃。 2) 由于 C 肽在溶液狀態(tài)下極不穩(wěn)定，所以先溶解標記物、抗體，待一切準備工作完畢后， 后溶解標準品。如果分析試劑盒一次用不完，要做若干次，那么把標準品溶解后盡快 分裝成若干份，并立即存放在–20℃保存，避免反復凍融。C 肽標記物的分裝、使用、 保存同標準品程序，避免反復凍融。 3) 在加分離試劑前，將分離試劑搖勻。 4) 分析試管放在 4℃溫育時，好套上塑料袋，避免蒸發(fā)，保持一定的反應體積。

[實驗方法] 1、 將實驗所需試劑及樣本放置室溫，凍干品按操作要求進行溶解,平衡至少 30 分鐘 以上才可進行操作； 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管進行編號，所有實驗均做雙管重復； 3、 每個 NSB 管加入 200µl 溫育液，每個標準品“0"管 加入 100µl 溫育液； 4、 取每個濃度的標準品（A~F）、質控血清和樣本 100µl 加入相應編號的試管中； 5、 每管均各加入 100µl 標記物工作液； 6、 除 T、NSB 管外，每管均各加入 100µl 抗體工作液，充分混勻； 7、 4℃溫育 24 小時； 8、 每管均各加入 500µl 分離劑后，充分混勻； 9、 室溫放置 15 分鐘后，離心 3500 轉／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液； 10、 用 γ-計數器測定每管 1 分鐘的放射性強度計數； 11、 從標準曲線上讀取樣本及質控血清的濃度。

[實驗過程中應注意] 1、 γ-計數器本底計數應≤100CPM/分，效率應≥75％； 2、 加入放射性標記物時，應做好防護、小心謹慎，以避免造成放射性污染； 3、 如果某一個樣本的測定值高于高濃度的標準品濃度，用零標準品以 1：2 或 1： 4 的比例稀釋樣本后重新測試，測試結果乘以相應的稀釋倍數。

[質量控制] 每次實驗操作應至少采用兩個濃度的質控血清進行質量控制，以確保每次實驗測定結果 的可靠性。 1、 質控血清的平均值應在允許范圍內； 2、 曲線方程應采用佳擬合方式； 3、 重復樣本的測定結果相差在 15％以內。 如不能同時滿足以上條件，則此次試驗結果無效，全部試驗需重新進行。

[測定結果的計算] 1、 計算標準品（A~F）、質控品和樣品與標準品 0 的比值（B/B0）; 2、 劑量-反應曲線按“對數劑量-結合率對數"（Log(dose-Log(B/ B0))數學模型或 四參數數學模型擬合，通過每個標準品的 B/B0和其濃度建立標準曲線； 3、 從標準曲線上查出樣本的濃度值，B/B0不在標準曲線之內的樣本及其濃度

[實驗的局限性] 1、 本品僅供體外診斷使用，只能用于科研血清樣本的測定而不能用于其他體液樣本； 2、 通過其它方法得到的 C-P 值與本品測定結果不具有直接的可比性；

C肽放射免疫實驗代測