TTC染色實(shí)驗(yàn)代測

TTC染色實(shí)驗(yàn)介紹：

TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物，1894年*合成用來檢測種子的生存能力，1958年開始用來染色檢測哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白

TTC染色實(shí)驗(yàn)步驟（僅供參考）：

1、動(dòng)物麻醉后立即取材，冷凍PBS從左心室灌注，整個(gè)灌注5分鐘內(nèi)必須完成；

2、入-20℃冰箱中速凍20-30min，便于切片；

3、用手術(shù)-刀片或是刮胡刀片切片，厚度2-3mm為宜；

4、將切片置于TTC孵育液中，放入37℃溫箱（不得高于40℃）或是水浴鍋中避光孵育15-30min，隨時(shí)觀察，間隔數(shù)分鐘翻動(dòng)組織，使其均勻接觸到染色液；

5、組織成色后，加入固定液終止反應(yīng)及保存組織，24h后拍照。

染色結(jié)果：正常組織呈紅色，梗死區(qū)呈蒼白色。

注意事項(xiàng)：

1、標(biāo)本越新鮮越好，動(dòng)物麻醉后取材需迅速，勿固定，刀片宜薄而鋒利，在冰箱中速凍的時(shí)間以能順利切片為宜，保持切片平整；

2、孵育液提前30min入37℃中水浴或是溫箱中加溫；

3、染色后的標(biāo)本浸存于10%中性甲醛或是4%多聚甲醛中，染色結(jié)果能保存數(shù)月，在陽光下易褪色；

4、TTC染色液避光4℃可保存數(shù)月，可重復(fù)利用2-3次。

TTC染色實(shí)驗(yàn)代測